AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi)，根據(jù)稱重精確測量流體體積，可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨中心孔中并送至廢液桶，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間，當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后，轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個微量離心管繼續(xù)收集，到收集完成后自動停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴增效率，而且由于采用微滴計數(shù)的方法進行定量，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值，對所測樣品中的核酸分子進行一定定量。在免疫系統(tǒng)中，據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制。干細(xì)胞提取試劑盒原理

血漿中的外泌體蛋白既可以當(dāng)作標(biāo)志物，也可以進行機理研究？首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個亞組：疾病進展期和疾病慢性期。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白組，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達(dá)，可以作為CLL進展期診斷的輔助標(biāo)志物。進一步，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進展期CLL患者外泌體中的高表達(dá)蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)，而NF-κB通路正是承接此效應(yīng)的關(guān)鍵通路。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細(xì)胞中，證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細(xì)胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進一步活躍NF-κB通路。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進展期CLL的標(biāo)志物，并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控，不斷活躍進展期CLL患者自身PBMC細(xì)胞中的NF-κB通路，促進CLL進展的特殊機理。細(xì)胞外囊泡研究進展采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響。

近年來，外泌體的捕獲技術(shù)越來越多，微流體系也被用于外泌體提取，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高，且可及時獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面，并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜，所需的樣本量取決于流動通道的長度。另外，樣品量的注入速率比較低，因此，對于大樣品量，將需要較長的處理時間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機理中具有重要的功能。目前，研究人員已經(jīng)開發(fā)了多種方法來分離外泌體，離心技術(shù)仍然是常用方法，其他方法，例如過濾、磁珠分離和色譜法等，也顯示出獨特的優(yōu)勢，但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法，研究人員應(yīng)針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。

免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性，變性后，通過SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中?？贵w特異性識別膜表面上的抗原，然后將膜暴露于第二抗體中。通過二抗的熒光標(biāo)簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測。常用的標(biāo)記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復(fù)性會受到所用抗體質(zhì)量的限制。外泌體的直徑比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。

細(xì)胞外小泡通過充當(dāng)脂肪組織、肝臟、骨骼肌和免疫細(xì)胞之間的細(xì)胞間通訊方式，在肥胖及其代謝并發(fā)癥的發(fā)展中發(fā)揮作用。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調(diào)節(jié)中起作用，外周胰島素敏感性是T2D發(fā)病機理的主要組成部分。外泌體似乎通過至少兩種不同的機制來調(diào)節(jié)胰島素敏感性，即通過調(diào)節(jié)炎癥或通過與胰島素反應(yīng)性部位的直接相互作用。后者可通過與主要胰島素信號分子（例如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信號通路）相互作用而影響胰島素信號通路而直接或間接發(fā)生。與對照組相比，糖尿病患者的血漿EV含量更高，并且與對照組相比，糖尿病小鼠的血漿外泌體數(shù)量也更高。然而，確定外泌體的作用及其在肝/腸軸通訊中的潛在作用將需要對它們的組成有更好的了解，特別是飲食是否會改變腸源性外泌體的含量，因此就胰島素反應(yīng)而言它們的生物學(xué)功能尚未研究。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和瘤子細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動分泌釋放。外泌體nta檢測步驟

外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)病）方面的潛力。干細(xì)胞提取試劑盒原理

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體，當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時，甚至可以進行定量。但是，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預(yù)處理。同樣，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。干細(xì)胞提取試劑盒原理

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