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血液中外泌體提取

來源: 發(fā)布時間:2023-03-15

AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器,將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉盤內,根據稱重精確測量流體體積,可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉盤的單獨中心孔中并送至廢液桶,避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間,當達到設定的提取體積后,轉盤會自動旋轉到下一個微量離心管繼續(xù)收集,到收集完成后自動停止。微滴式數字PCR技術不佳有效提高了核酸分子的擴增效率,而且由于采用微滴計數的方法進行定量,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,對所測樣品中的核酸分子進行一定定量。從研究上來講并不太嚴格區(qū)分外泌體或微泡。外泌體的提取分離方法:PEG-base沉淀法。血液中外泌體提取

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外泌體生物學功能:1、在心血管系統(tǒng)中,據報道,源自人胚胎干細胞(ESC)的間充質干細胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統(tǒng)中,據報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制;3、在中樞的神經系統(tǒng)(CNS)中,外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動,從而阻止神經退行性疾病的發(fā)病機理;迄今為止,尚未完全發(fā)現(xiàn)調節(jié)外泌體-細胞結合的途徑。然而,比較明顯,其結合過程從外泌體識別受體細胞PM上的特定受體開始。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎,它可能活躍受體并隨后導致相關信號通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內吞作用,從而導致蛋白質和RNA直接釋放到受體細胞中。小膠質細胞外泌體對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預后分析。

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外泌體生物學功能:1、在心血管系統(tǒng)中,據報道,源自人胚胎干細胞(ESC)的間充質干細胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統(tǒng)中,據報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制;3、在中樞的神經系統(tǒng)(CNS)中,外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動,從而阻止神經退行性疾病的發(fā)病機理;迄今為止,尚未完全發(fā)現(xiàn)調節(jié)外泌體-細胞結合的途徑。然而,比較明顯,其結合過程從外泌體識別受體細胞PM上的特定受體開始。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎,它可能活躍受體并隨后導致相關信號通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內吞作用,從而導致蛋白質和RNA直接釋放到受體細胞中。從研究上來講并不太嚴格區(qū)分外泌體或微泡。

透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,在SEM中,電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,捕獲并檢測散射的電子,從而生成粒子圖像。但是,在TEM中,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,并使用熒光屏進行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質會對電鏡結果造成影響;另外樣品的準備階段比較復雜,不適合進行大量快速的測量;而且由于樣本經過了干燥、固定以及冷凍等預處理和制備過程,對生物樣本的結構會造成一定的破壞,從而影響觀察的效果,無法準確測量外泌體濃度。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。外泌體是細胞分泌的納米級膜微粒,能在細胞與細胞之間傳遞信息。

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ELISA與WB的原理一樣,在抗體包被的微孔板中加入待測樣品、封閉、一抗孵育,洗滌后加入酶標待測物形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,徹底洗滌后加顯色劑并用酶標儀測定吸光值,結尾用標準曲線計算外泌體表達量。ELISA能實現(xiàn)對外泌體特異性蛋白的定量。其他外泌體鑒定方法還有微流體測定法和外泌體蛋白質組學分析等。由于外泌體在各種生命過程中的重要作用及其作為疾病生物標志物和藥物輸送系統(tǒng)的潛力,人們對此領域的興趣越來越高。盡管目前在技術上取得了長足的進步,但尚未建立對外泌體進行準確和標準化鑒定以及定量的方法,關于外泌體的量應由囊泡顆粒的數量、囊泡蛋白的量或囊泡數與蛋白之比來定義仍存在比較多爭論。建立外泌體分離、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題。外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。唾液提取試劑盒成分

外泌體可以通過多種方法給藥,靜脈內給藥是較常用的途徑。血液中外泌體提取

外泌體發(fā)現(xiàn)于1986年,是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結構小體,可由機體內多種細胞如免疫細胞、干細胞、心血管細胞、網織紅細胞、血小板、神經細胞和肉瘤細胞等主動分泌產生,普遍分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等體液中。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質,在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗肉瘤免疫等生理過程,與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。血液中外泌體提取

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