磁珠免疫法分離外泌體：將針對(duì)目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對(duì)于ELISA的好處主要是，珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體，從而提高了分離效率。此外，使用磁珠時(shí)，樣品起始體積沒有上限，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL，且ELISA洗脫雜質(zhì)時(shí)容易造成孔間交叉污染。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時(shí)，磁珠法可分離出更純凈的外泌體，特異性高、速度更快，并且不需要昂貴的儀器。另外，與其他分離方法（如超速離心或超濾）相比，磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時(shí)，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。外泌體實(shí)際應(yīng)用之前，需要使用大型動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究和臨床試驗(yàn)。胸水外泌體iTRAQ

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成，其大小均一，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標(biāo)記物、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。組織外泌體提取試劑盒價(jià)格利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。

外泌體與免疫反應(yīng)、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中樞的神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病和病癥進(jìn)展相關(guān)。由外泌體傳遞到受體細(xì)胞的蛋白質(zhì)、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應(yīng)。這種外泌體介導(dǎo)的反應(yīng)可以促進(jìn)或阻止疾病。外泌體在調(diào)節(jié)復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途，包括神經(jīng)退行性疾病和病癥。外泌體可被設(shè)計(jì)用于遞送不同的診療有效載荷，包括短干擾、反義寡核苷酸、化療藥物和免疫調(diào)節(jié)劑，并具有將其遞送到預(yù)期目標(biāo)的能力。

AFC自動(dòng)收集器是將qEV分離法這一過程自動(dòng)化的儀器，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi)，根據(jù)稱重精確測量流體體積，可精確的測量到樣品中每一個(gè)液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨(dú)中心孔中并送至廢液桶，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間，當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后，轉(zhuǎn)盤會(huì)自動(dòng)旋轉(zhuǎn)到下一個(gè)微量離心管繼續(xù)收集，到收集完成后自動(dòng)停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率，而且由于采用微滴計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行定量，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號(hào)和Ct值，對(duì)所測樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量。從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用。

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報(bào)道，并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。疾病的進(jìn)展和對(duì)診療的反應(yīng)也可以通過外泌體的多組分分析來確定的。外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經(jīng)系統(tǒng)是外泌體遞送藥物的一個(gè)明顯優(yōu)勢。血液外泌體粒徑檢測

外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成。胸水外泌體iTRAQ

外泌體為細(xì)胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領(lǐng)域。外泌體還顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿?。但是，在實(shí)際應(yīng)用外泌體之前，需要使用大型動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步研究和臨床試驗(yàn)。同時(shí)需要開發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術(shù)和策略。另外，在研究和評(píng)估外泌體的副作用和功效時(shí)，必須考慮到肉瘤細(xì)胞來源的外泌體可能增強(qiáng)肉瘤生長的潛在風(fēng)險(xiǎn)。外泌體給藥途徑：給藥途徑是獲得所需功效的重要參數(shù)。外泌體可以通過多種方法給藥，但是，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。通過利用增強(qiáng)通透性和保留（EPR）效應(yīng)，在荷瘤動(dòng)物中靜脈內(nèi)遞送外來體似乎是有用的。在某些容易達(dá)到肉瘤部位的不同惡性肉瘤中，外泌體療法的給藥途徑是瘤內(nèi)注射。在疾病部位直接注射外泌體的優(yōu)點(diǎn)是可以特異性地運(yùn)送裝載的藥物。另外口服給藥，腹腔給藥，皮內(nèi)給藥和鼻內(nèi)給藥途徑已成功用于外泌體遞送。胸水外泌體iTRAQ

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