HE染色攻略:HE染色又稱為蘇木精-伊紅染色,染色后組織或細(xì)胞可以借助普通光學(xué)顯微鏡觀察與鑒別細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死的一種染色方法。這種方法適用范圍***,對(duì)組織細(xì)胞的各種成分都可著色,便于***觀察組織構(gòu)造,而且適用于各種固定液固定的材料,染色后不易褪色可長(zhǎng)期保存。經(jīng)過(guò)HE染色,細(xì)胞核被蘇木素染成藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色??梢杂^察細(xì)胞結(jié)構(gòu)、組織層次等等。首先切片組織是否完整,組織有無(wú)損傷;然后看切片有無(wú)刀痕;***細(xì)胞核是否清晰可見(jiàn),胞核與包漿要對(duì)比鮮明。腎臟組織HE染色如何觀察。上海專業(yè)的HE染色檢測(cè)
HE染色脫蠟不凈的原因及驗(yàn)證方法:1)二甲苯使用過(guò)久,含蠟成分太高或脫蠟效果差:可更換二甲苯驗(yàn)證。2)切片經(jīng)烤片,冷卻后放入二甲苯脫蠟或室溫太低;延長(zhǎng)拖拉時(shí)間或用熱的切片脫蠟驗(yàn)證。3)脫蠟時(shí)間太短或振蕩太少,幅度太小;可延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間或以多振蕩來(lái)驗(yàn)證。4)洗滌二甲苯用的乙醇使用時(shí)間過(guò)久,導(dǎo)致乙醇中二甲苯含量過(guò)高,二甲苯殘留在切片上(由于二甲苯與水不相溶,切片上有二甲苯的地方,蘇木精就沒(méi)有辦法滲透進(jìn)去,在切片染色完成后留下了點(diǎn)狀的不著**域):更換各道乙醇驗(yàn)證。5)二甲苯、乙醇質(zhì)量不佳(偶有試劑瓶?jī)?nèi)裝的試劑與試劑名不相符):換批號(hào)驗(yàn)證。6)更換脫蠟液體時(shí)試劑拿錯(cuò):需重新配置驗(yàn)證。7)更換脫蠟液體時(shí)試劑次序放錯(cuò):需重新配置驗(yàn)證。8)烤片時(shí)間短,切片上水分沒(méi)有烤干,也會(huì)導(dǎo)致著色不勻,出現(xiàn)點(diǎn)狀發(fā)白區(qū)域。上海值得信賴的HE染色服務(wù)海馬組織HE染色如何觀察。
HE染色觀察肝臟HE染色切片,首先要在顯微鏡下找到肝臟的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)——肝小葉。顯微鏡首先調(diào)4倍物鏡,調(diào)準(zhǔn)焦螺旋至視野清晰,可以看到肝小葉結(jié)構(gòu)。人的肝小葉之間結(jié)締組織少,小葉分隔不明顯,但動(dòng)物如豬或小鼠,其肝小葉分界非常明顯。肝小葉**有**靜脈,在橫切片上顯示為空洞。肝小葉之間為將物鏡調(diào)制10倍或20倍,就可以清楚地看到肝小葉結(jié)構(gòu)。肝細(xì)胞以**靜脈為中心向周?chē)派錉钆帕?,稱為肝板。一般在20倍物鏡下可以清晰看到肝細(xì)胞。20倍物鏡下,肝細(xì)胞內(nèi)染色為藍(lán)色的是細(xì)胞核,細(xì)胞核大而圓,居中,異染色質(zhì)少而著色淺,能清晰看到核仁。肝細(xì)胞胞質(zhì)豐富,多成嗜酸性,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)合成旺盛時(shí),胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)散在的嗜堿性物質(zhì)。肝細(xì)胞內(nèi)有豐富的細(xì)胞器比如溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),等等,但是在光鏡下是無(wú)法看到的,需要在電鏡下才能觀察到。當(dāng)然,肝小葉內(nèi)除了肝細(xì)胞,還有膽小管、肝血竇、肝巨噬細(xì)胞等組織形態(tài),但是在HE染色時(shí)并不容易觀察到。做肝臟HE染色切片主要目的一般都是為了觀察肝細(xì)胞形態(tài)是否完整、胞核有無(wú)增大、肝小葉形態(tài)是否完整,以檢測(cè)藥物等刺激因素對(duì)肝臟的損傷作用。
HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項(xiàng):多聚甲醛放置過(guò)久其中的醛基可能會(huì)被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類(lèi)以及組織塊的大小來(lái)調(diào)整固定時(shí)間。多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過(guò)久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過(guò)24小時(shí)。多聚甲醛可長(zhǎng)期存在于固定過(guò)的細(xì)胞或組織樣品中,固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時(shí)仍會(huì)有殘留,因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。比較常見(jiàn)的病理染色HE染色?
HE染色在**染色中的應(yīng)用,小細(xì)胞肺*是肺*中分化程度比較低、惡性程度比較高的一種惡性**,生長(zhǎng)迅速,轉(zhuǎn)移較早,五年存活率*為1%-2%,預(yù)后非常差。其小細(xì)胞肺***細(xì)胞HE染色的特征,主要表現(xiàn)為組織結(jié)構(gòu),包括巢狀、小梁狀、實(shí)性片狀,常有菊形團(tuán)形成,*巢周?chē)牧黾?xì)胞呈柵欄狀排列,*細(xì)胞較小,一般小于三個(gè)靜止的淋巴細(xì)胞,呈圓形、卵圓形或短梭形,胞質(zhì)稀少,胞界不清,核染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀,核仁缺乏或不明顯,核分裂象每十個(gè)高倍視野大于十一個(gè),常見(jiàn)大片狀壞死。冰凍切片是否可以做HE染色?上海專業(yè)的HE染色檢測(cè)
HE染色試驗(yàn)技術(shù)及注意事項(xiàng)。上海專業(yè)的HE染色檢測(cè)
HE染色結(jié)果判讀:細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。著色狀況與組織或細(xì)胞的種類(lèi)有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí),伊紅著色由淺變深。H-E染色評(píng)定標(biāo)準(zhǔn):(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均勻,無(wú)皺褶無(wú)刀痕;(2)染色核漿分明,紅藍(lán)適度,透明潔凈,封裱美觀。上海專業(yè)的HE染色檢測(cè)