什么樣本可以做二代測(cè)序?②
組織樣本
新鮮組織:如手術(shù)切除的**組織、活檢組織等。新鮮組織樣本中的細(xì)胞完整性較好,能夠提供高質(zhì)量的DNA和RNA。在**研究中,對(duì)新鮮**組織進(jìn)行全基因組測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等,可以深入了解**的基因突變、基因表達(dá)變化等情況。例如,在研究結(jié)直腸*的發(fā)病機(jī)制時(shí),對(duì)手術(shù)切除的結(jié)直腸*組織及其*旁組織進(jìn)行測(cè)序,比較兩者之間的差異,以發(fā)現(xiàn)**相關(guān)的基因變異和表達(dá)調(diào)控異常。
福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織:這是臨床上常用的保存組織樣本的方式。FFPE組織中的DNA和RNA會(huì)有一定程度的損傷和降解,但經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)奶崛『托迯?fù)處理后,仍然可以用于二代測(cè)序。在回顧性研究中,大量的FFPE組織存檔樣本可以被利用起來(lái)。例如,對(duì)多年前保存的乳腺*FFPE組織進(jìn)行測(cè)序,研究乳腺*的疾病進(jìn)展和***反應(yīng)相關(guān)的基因變化。 二代測(cè)序的原理是什么?徐匯區(qū)哪里有二代測(cè)序流程
什么樣本可以做二代測(cè)序?④
4、口腔樣本
口腔拭子:通過(guò)刮取口腔黏膜細(xì)胞來(lái)獲取樣本??谇皇米硬杉奖恪o(wú)創(chuàng),可用于DNA提取和基因檢測(cè)。例如,在法醫(yī)鑒定中,口腔拭子是常用的樣本來(lái)源,用于個(gè)體身份識(shí)別和親子關(guān)系鑒定等;在一些大規(guī)模的人群基因篩查項(xiàng)目中,也可以使用口腔拭子來(lái)收集樣本。
5、糞便樣本
糞便中含有腸道微生物、腸道上皮細(xì)胞等成分。對(duì)糞便樣本進(jìn)行宏基因組測(cè)序,可以研究腸道微生物群落的組成、功能和多樣性。例如,在腸道疾?。ㄈ缪装Y性腸病、結(jié)直腸*等)的研究中,分析糞便中微生物群落結(jié)構(gòu)的變化,以及微生物基因的表達(dá)情況,有助于了解疾病的發(fā)病機(jī)制和尋找潛在的生物標(biāo)志物。 山東二代測(cè)序技術(shù)一代和二代測(cè)序的區(qū)別?
二代測(cè)序的建庫(kù)步驟④
四、接頭連接
接頭選擇:根據(jù)測(cè)序平臺(tái)的要求選擇合適的接頭。不同的二代測(cè)序平臺(tái)(如Illumina、IonTorrent等)有各自特定設(shè)計(jì)的接頭。這些接頭包含與測(cè)序平臺(tái)的流動(dòng)池(flowcell)表面互補(bǔ)的序列,用于將DNA片段固定在測(cè)序芯片上,還包含用于區(qū)分不同樣本的索引序列(index)等。
連接反應(yīng):使用DNA連接酶將接頭與DNA片段連接。T4DNA連接酶是常用的連接酶,它可以在ATP(三磷酸腺苷)存在下,將接頭的5'-磷酸基團(tuán)與DNA片段的3'-羥基形成磷酸二酯鍵,從而將接頭連接到DNA片段的兩端。連接反應(yīng)的條件(如溫度、連接酶的用量、反應(yīng)時(shí)間等)需要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行優(yōu)化,以確保較高的連接效率。
二代測(cè)序——數(shù)據(jù)分析類問(wèn)題
二代測(cè)序數(shù)據(jù)分析的主要內(nèi)容和挑戰(zhàn)是什么:主要內(nèi)容包括數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制、序列比對(duì)、變異檢測(cè)、基因表達(dá)定量、功能注釋等。挑戰(zhàn)在于數(shù)據(jù)量巨大,需要高效的計(jì)算資源和復(fù)雜的生物信息學(xué)算法來(lái)處理;數(shù)據(jù)質(zhì)量參差不齊,需要嚴(yán)格的質(zhì)量控制和過(guò)濾;變異解讀復(fù)雜,需要結(jié)合生物學(xué)知識(shí)和數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行準(zhǔn)確的評(píng)估。如何從海量的二代測(cè)序數(shù)據(jù)中篩選出有意義的信息:通過(guò)設(shè)定合理的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)過(guò)濾低質(zhì)量數(shù)據(jù),然后根據(jù)研究目的進(jìn)行針對(duì)性的分析,如在疾病研究中,重點(diǎn)關(guān)注與疾病相關(guān)的基因區(qū)域的變異和表達(dá)變化;利用已知的生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和功能注釋信息對(duì)檢測(cè)到的變異和基因進(jìn)行注釋和篩選,優(yōu)先關(guān)注那些對(duì)蛋白質(zhì)功能、基因調(diào)控等有***影響的變異和差異表達(dá)基因。 二代測(cè)序是一種能夠同時(shí)對(duì)數(shù)百萬(wàn)甚至數(shù)十個(gè)億DNA片段進(jìn)行測(cè)序的方法。
二代測(cè)序的操作流程有哪些?
1.DNA提取與質(zhì)檢
· 純凈、足量、質(zhì)量好的樣本DNA是檢測(cè)成功的基礎(chǔ)(可以來(lái)源于血漿、新鮮組織等)
2.DNA處理→文庫(kù)構(gòu)建
· 得到統(tǒng)一長(zhǎng)度區(qū)間+有接頭的DNA片段
· 步驟:DNA打斷→末端修復(fù)→片段篩選→加A尾→接頭連接→PCR
3.靶向捕獲
· 特定區(qū)域基因的定向檢測(cè)
4.上機(jī)測(cè)序
· 根據(jù)通量情況選擇測(cè)序儀
· 上樣后機(jī)器完成
5.數(shù)據(jù)分析
· 初級(jí)分析:光強(qiáng)數(shù)據(jù)(不同熒光標(biāo)記堿基)→序列信息(AGCT)
· 二級(jí)分析 多儀器自帶
· 三級(jí)分析 vcf文件 可diy 二代測(cè)序使用的是哪種設(shè)備?安徽二代測(cè)序原理
二代測(cè)序常用于醫(yī)學(xué)篩查或診斷。徐匯區(qū)哪里有二代測(cè)序流程
什么樣本可以做二代測(cè)序?③
細(xì)胞樣本
培養(yǎng)細(xì)胞:包括各種原代培養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞系。在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中,對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序可以了解細(xì)胞的基因特征和功能變化。例如,在研究細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路時(shí),對(duì)經(jīng)過(guò)特定刺激處理的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,以分析基因表達(dá)的上調(diào)或下調(diào)情況。
脫落細(xì)胞:如痰液中的脫落細(xì)胞、尿液中的脫落細(xì)胞等。這些細(xì)胞可以用于某些疾病的篩查。例如,在肺*篩查中,對(duì)痰液中的脫落細(xì)胞進(jìn)行基因檢測(cè),通過(guò)二代測(cè)序?qū)ふ曳?相關(guān)的基因突變,作為一種非侵入性的檢測(cè)方法。 徐匯區(qū)哪里有二代測(cè)序流程
嘉安健達(dá)醫(yī)學(xué)科技(上海)有限公司在同行業(yè)領(lǐng)域中,一直處在一個(gè)不斷銳意進(jìn)取,不斷制造創(chuàng)新的市場(chǎng)高度,多年以來(lái)致力于發(fā)展富有創(chuàng)新價(jià)值理念的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn),在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中始終保持良好的商業(yè)口碑,成績(jī)讓我們喜悅,但不會(huì)讓我們止步,殘酷的市場(chǎng)磨煉了我們堅(jiān)強(qiáng)不屈的意志,和諧溫馨的工作環(huán)境,富有營(yíng)養(yǎng)的公司土壤滋養(yǎng)著我們不斷開拓創(chuàng)新,勇于進(jìn)取的無(wú)限潛力,嘉安健達(dá)醫(yī)學(xué)科技供應(yīng)攜手大家一起走向共同輝煌的未來(lái),回首過(guò)去,我們不會(huì)因?yàn)槿〉昧艘稽c(diǎn)點(diǎn)成績(jī)而沾沾自喜,相反的是面對(duì)競(jìng)爭(zhēng)越來(lái)越激烈的市場(chǎng)氛圍,我們更要明確自己的不足,做好迎接新挑戰(zhàn)的準(zhǔn)備,要不畏困難,激流勇進(jìn),以一個(gè)更嶄新的精神面貌迎接大家,共同走向輝煌回來(lái)!